本指南依据标准化检验方法制定，专为验证保健食品受试样品控制体内脂肪功效使用，整体分为大鼠动物实验、人体试食试验两大核心模块。其中动物实验包含肥胖模型、预防肥胖模型两种试验方案，人体试食试验分为不替代主食、替代主食两类试验方案。全程严格管控饮食、运动等干扰变量，对试验分组、给药干预、指标检测、数据判定进行规范化说明，可直接用于保健食品控脂功效合规检验。

一、动物实验方案规范

1.1 试验原理

采用高热量饲料诱导大鼠建立肥胖模型，设置两种经典试验体系：

• 肥胖模型法：先完成肥胖模型造模，成型后给予受试物干预

• 预防肥胖模型法：造模与受试物给药同步进行，预防脂肪堆积

通过对比各组大鼠体重变化、内脏脂肪重量、脂体比核心指标，综合判定受试样品的体内脂肪控制效果。

1.2 仪器与试剂

试验仪器：动物电子天平、解剖手术全套器械

试验试剂：1%戊巴比妥钠（动物麻醉专用）

1.3 试验动物

选用健康试验大鼠，初始体重控制为200±20g；同组别设置8~12只大鼠，所有动物统一饲养于SPF屏障环境，保障试验环境标准化。

1.4 试验饲料配置

基础维持饲料：完全符合国家饲料营养标准，满足大鼠基础生长需求。

高热量造模饲料：在维持饲料基础上，添加15.0%蔗糖+15.0%猪油，搭配酪蛋白、磷酸氢钙、石粉调配；除粗脂肪指标外，水分、蛋白质、粗纤维、灰分、钙、磷等其余营养指标，均与国标维持饲料保持一致，保证造模变量唯一。

1.5 分组规则

试验常规设置：空白对照组、模型对照组、3个剂量试验组，可根据试验需求增设阳性对照组。

剂量设置标准：以人体推荐摄入量的5倍作为中间剂量组，高低剂量组按梯度按需配比；受试样品灌胃干预周期统一为6~10周。

1.6 两类动物模型操作流程

方案A：肥胖模型法（成型后干预）

第一步：适应期（5~7d）

所有大鼠统一饲喂基础维持饲料，在屏障环境中常规驯养，适应试验饲养环境，消除环境应激干扰。

第二步：造模筛选期（8周）

随机分为两组：空白对照组10只（全程饲喂维持饲料）、造模组60只（全程饲喂高热量造模饲料）。试验期间每周精准记录投料量、撒料量、剩料量及大鼠体重；饲喂2周后，淘汰体重增重排名后1/3的肥胖抵抗大鼠，剩余40只肥胖敏感大鼠继续高热量饲喂6周，完成肥胖模型构建。

第三步：样品干预期（6~10周）

将40只造模成功的肥胖大鼠随机分为模型对照组+3个剂量试验组。空白组持续饲喂维持饲料，其余四组全程饲喂高热量饲料；各剂量组按标准灌胃受试物，模型对照组、空白组灌胃等体积空白溶剂。每周固定时间称重，统计各组摄食量。

终点取材检测：采用1%戊巴比妥钠（0.5mL/100g体重）对大鼠进行麻醉解剖，精准摘取肾周、睾丸周围内脏脂肪并称重，计算脂肪/体重比值（脂体比）。

方案B：预防肥胖模型法（造模同步干预）

第一步：适应期（5~7d）

遵循与肥胖模型法一致的驯养标准，统一环境、统一饲料完成适应性饲养。

第二步：造模筛选期（2周）

分组、饲喂方式、肥胖敏感大鼠筛选规则同上，最终留存40只合格肥胖敏感大鼠。

第三步：同步给药期（6~10周）

将40只大鼠分为模型对照组+3个试验组，全程饲喂高热量造模饲料；试验组同步灌胃受试样品，对照组灌胃等量空白溶剂；空白组全程常规饲喂维持饲料。

终点检测：试验周期结束后，麻醉解剖大鼠，摘取内脏脂肪称重，计算脂体比，完成指标检测。

1.7 动物观测核心指标

大鼠体重、体重增重、每日摄食量、总摄入热量、食物利用率、肾周及睾丸周脂肪重量、脂肪/体重比值。

1.8 数据统计与阳性判定标准

数据处理方法：首先开展方差齐性检验，方差齐性数据采用单因素方差分析+q检验；方差不齐数据先进行数据转换，转换无效后改用秩和检验。

阳性判定标准：试验组大鼠体重、体重增重、内脏脂肪重量、脂体比指标，显著低于模型对照组（P＜0.05），且各组大鼠摄食量无显著下降，即可判定该样品动物试验结果为阳性，具备控脂效果。

二、人体试食试验方案规范

2.1 受试者入组与排除标准

纳入标准

单纯性肥胖成年人群，满足以下任一条件：BMI≥30；男性体脂率＞25%；女性体脂率＞30%。所有受试者自愿参与试验，并签署知情同意书。

排除标准

1、心、肝、肾、造血系统重大疾病及精神类疾病患者；

2、试验短期内服用过减脂、降脂类产品，可能干扰试验结果者；

3、依从性差，无法按要求服用受试物、配合试验流程，试验资料不全者。

2.2 两种试验设计方案

方案1：不替代主食试验

采用自身对照+组间平行对照设计，试食组、对照组有效病例数均≥50例；试验前对受试者年龄、性别、饮食、运动习惯进行均衡性检验，保证组间基线一致；全程采用双盲试验，对照组服用安慰剂或做空白处理。

试验周期：受试者连续服用受试物≥60d。

方案2：替代主食试验

采用单组自身前后对照设计，不设置平行对照组，有效受试人数≥50例；受试者每日使用受试物替换1~2餐正餐主食，同步指导受试者合理增加果蔬摄入，保障膳食均衡。

试验周期：连续食用受试物≥35d。

2.3 膳食营养管控标准

最低摄入热量：受试者每日摄入能量，男性≥1200kcal，女性≥1000kcal，杜绝节食干扰。

核心营养素达标：每日蛋白质摄入（男性75g、女性65g），钙800mg、磷700mg、钾2000mg，严格符合国标DRs参考摄入量标准。

生活习惯管控：试验全程，受试者饮食结构、日常运动量需与试验前保持一致，禁止刻意节食、高强度运动；试验前、试验后各完成3天膳食问卷调查，精准把控膳食变量。

2.4 试验观测指标

（1）安全性观测指标

一般体征（精神状态、睡眠、大小便、血压）；血常规、尿常规、便常规、肝肾功能、血尿酸、尿酮；试验前胸片、心电图、腹部B超检查；功率自行车运动耐力测试（最大摄氧量测定）；全程记录腹泻、厌食等各类不良反应。

（2）功效评价核心指标

基础体态指标：身高、体重、腰围（脐周）、臀围。

体脂检测指标：体脂总量、体脂百分率（采用水下称重法/生物电阻抗法检测）。

皮下脂肪指标：检测4个固定位点皮褶厚度（皮卡钳检测/B超检测），分别为：右臂三角肌中点、右肩胛下角、脐旁3cm、右髂前上棘。

2.5 数据统计方法

自身对照数据采用配对t检验，组间对比数据采用成组t检验；方差不齐数据先进行标准化转换，无法满足正态分布要求时改用秩和检验；变异系数CV＞50%的数据，直接采用秩和检验分析。

2.6 人体试验功效判定标准

不替代主食类样品

试食组自身前后对比+与对照组组间对比，体内脂肪含量显著下降，4处皮下脂肪至少2处厚度变薄，腰围/臀围任一维度指标显著下降（P＜0.05）；同时受试者运动耐力无下降、无健康损伤，排除饮食、运动干扰，可判定样品具备控制体内脂肪功效。

替代主食类样品

受试者试验前后自身对比，体脂含量、皮下脂肪厚度、身体围度指标满足上述下降标准；膳食营养评价合格，受试者体能、情绪、工作能力无负面影响，排除运动等干扰因素，可判定样品具备控制体内脂肪功效。

三、试验通用质控核心要点

1、动物试验全程标准化：每周固定时间统计饲料投喂量、剩余量，固定时间对大鼠称重，保证试验数据时序统一、标准统一。

2、人体试验变量管控：试验期间严禁受试者刻意节食、开展高强度运动，必须保持试验前原有生活、运动、饮食习惯，规避人为干扰试验结果。

3、试验数据溯源管理：所有原始试验数据完整存档，试验分组、干预周期、给药记录、统计方法全程可追溯，满足保健食品检测合规要求。