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保健食品指南方案丨缓解体力疲劳功能动物实验方案
百环生物作为大健康功效科学循证先行者，搭建细胞、线虫、斑马鱼、大小鼠多维实验平台，可开展功效验证、机制解析、配方筛选、安全性评价及专利定制实验，出具可溯源、可宣传、可支撑法规申报的权威报告，为产品创新与专利布局提供硬核科学依据。
01 实验名称 受试样品缓解体力疲劳功能验证实验（小鼠模型）
02 实验目的
依据缓解体力疲劳检验方法，通过负重游泳实验及血清尿素、肝糖原、血乳酸三项生化指标检测，判定受试样品是否具有缓解体力疲劳的作用。
03 实验原理 负重游泳实验：运动耐力直接反映抗疲劳能力，小鼠负重游泳时间越长，疲劳缓解效果越显著。 血清尿素测定：运动后血清尿素为疲劳代谢产物，含量越低，抗疲劳效果越好。 肝糖原测定：肝糖原是机体运动能量储备，含量越高，抗疲劳能力越强。 血乳酸测定：血乳酸是运动疲劳关键指标，曲线下面积越小，疲劳恢复越快。 最终判定：负重游泳实验阳性，且三项生化指标中任意两项阳性，即可判定样品具有缓解体力疲劳作用。
04 实验材料与仪器 （一）实验仪器 游泳箱（50cm×50cm×40cm）、电子天平、721 分光光度计、全自动生化仪、离心机、匀浆器、沸水浴、恒温水浴锅、扭力天平、移液泵、灌胃针头、手术器械、带塞试管 / 离心管。 （二）实验试剂 铅皮、二乙酰一肟试剂盒、蒽酮试剂、血乳酸检测试剂、尿素标准液、葡萄糖标准液、三氯醋酸、浓硫酸、对羟基联苯等。 （三）实验样品 受试样品、阴性对照（蒸馏水 / 溶剂）、阳性对照（可选，已知抗疲劳样品）。
品系：纯系健康成年雄性小鼠 体重：18~22g 饲养：清洁级环境，自由摄食饮水，适应环境 3~5 天后开始实验。
分组：设阴性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，必要时增设阳性对照组。 剂量：中剂量组为人体推荐量的 10 倍，低、高剂量按等比梯度设置。 给药时间：连续灌胃 30 天，必要时延长至 45 天；酒类样品测试当天不灌胃。
（一）负重游泳实验 末次给药 30min 后，小鼠尾根部负荷5% 体重的铅皮。 放入游泳箱，水深≥30cm，水温25℃±1.0℃。 记录小鼠从游泳开始至死亡的时间，即负重游泳时间。 （二）血清尿素测定 末次给药 30min 后，小鼠在 30℃水中不负重游泳 90min，休息 60min 后摘眼球采血。 血液 4℃静置 3h，2000r/min 离心 15min，取血清。 采用全自动生化仪法或二乙酰一肟法测定血清尿素含量。 （三）肝糖原测定（蒽酮法） 末次给药 30min 后处死小鼠，取肝脏，生理盐水漂洗、滤纸吸干。 精确称取 100mg 肝脏，加 8mL 5% 三氯醋酸匀浆，3000r/min 离心 15min 取上清。 乙醇沉淀糖原，蒸馏水溶解后加蒽酮试剂，沸水浴 15min，620nm 波长测吸光度，计算肝糖原含量。 （四）血乳酸测定 末次给药 30min 后，分别在游泳前、游泳后 0min、休息 20min三个时间点采血。 小鼠在 30℃水中不负重游泳 10min。 采用自配试剂法或乳酸盐测定仪法测定血乳酸，计算血乳酸曲线下面积。
08 数据处理
所有数据为计量资料，先做方差齐性检验。 方差齐：计算 F 值，F≥F₀.₀₅（P≤0.05），组间两两比较。 非正态 / 方差不齐：变量转换后再分析；转换无效则用秩和检验。 差异显著性判定标准：P≤0.05。
09 结果判定
单项阳性标准 负重游泳：受试组游泳时间显著长于对照组。 血清尿素：受试组含量显著低于对照组。 肝糖原：受试组含量显著高于对照组。 血乳酸：受试组曲线下面积显著小于对照组。 2.最终判定： 负重游泳实验阳性，且血清尿素、肝糖原、血乳酸中任意两项阳性，判定受试样品具有缓解体力疲劳作用。
10 注意事项
游泳箱单次放鼠不宜过多，避免相互挤靠；水温严格控制 25℃，每批实验前测温。 铅皮缠绕松紧适宜，实验中保持小鼠四肢运动。 受试组与对照组用同一批小鼠同时实验，减少体质差异。 生化检测严格控制加样量、煮沸 / 冷却时间，显色后 30min 内读吸光度。 蒽酮试剂现配现用，避免污染；血乳酸检测避免色度转移。
